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    elisa競爭法的操作步驟

    發(fā)布時間: 2015-07-13  點擊次數(shù): 1235次

        競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。

    操作步驟如下:
    (1)將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。
    (2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原,則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標本中含有抗原,則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合,競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會,使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標抗原,保溫后,酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達zui充分的量。洗滌。
    (3)加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標抗原zui多,故顏色zui深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標本中抗原含量越多。

    原理
    ELISA是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應用中,通過不同的設計,具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法(圖a)、用于檢測抗原的雙抗體夾心法(圖b)以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。

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