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    小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)ELISA試劑盒

    發(fā)布時(shí)間: 2023/1/9  點(diǎn)擊次數(shù): 1565次
    提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大小:
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    小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)ELISA試劑盒

    檢測(cè)范圍:96T

    9.5 U/mL - 320 U/mL


    使用目的:

    本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性。


    實(shí)驗(yàn)原理:

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)水平。用純化的小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入亮氨酸氨基肽酶(LAP),再與HRP標(biāo)記的亮氨酸氨基肽酶(LAP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的。顏色的深淺和樣品中的亮氨酸氨基肽酶(LAP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)活性濃度。 


    試劑盒組成: 

    4.png


    標(biāo)本要求: 

    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


    小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)ELISA試劑盒操作步驟:

    1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

    4.png

    2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

    4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 

    7.溫育:操作同3。

    8.洗滌:操作同5。

    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.

    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

    11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。


    操作程序總結(jié):


    333.JPG


    計(jì)算:

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。 


    注意事項(xiàng):

    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

    4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物請(qǐng)避光保存。

    7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

    9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。


    小鼠亮氨酸氨基肽酶(LAP)ELISA試劑盒保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存:2-8℃。

    2.有效期:6個(gè)月


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