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    用人血清進行噬菌體ElISA

    發布時間: 2011-10-15  點擊次數: 2005次

    用人血清進行噬菌體ElISA

    [器材和試劑]
    ● 包被緩沖液
    ● PBST
    ● PBBST[PBS,1%TritonX—100,3% BSA(Sigma)]
    ● 兔抗人Fc—特異性IgG(Pierce):用包 被緩沖液稀釋為5.0ug/ml①
    ● HRP標記的抗噬菌體抗體(Amersham Biosciences):用封閉液以1/10000比例 稀釋
    ● 顯色液[3,3’,5,5’—四甲基聯苯胺 (TMB)液體底物系統,Sigma]

    [方法]
    1.將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過夜。
    2.用PBST洗滌多孔板。
    3.加250ul PBBST。37℃孵育2小時。
    4.棄去PBBST,將200ul噬菌體上清等量加入各孔。每孔中加入0.25ul血清,37℃振 蕩孵育60分鐘。
    5,用PBST洗滌板孔。
    6.加200gl HRP標記的羊抗噬菌體抗體。37℃振蕩孵育30分鐘。
    7.用PBST洗滌板孔。
    8.每孔中加200ul顯色液。室溫避光孵育15分鐘。加25ul 2mol/L H2S04終止反應。分 析前在酶標儀中振蕩10秒。
    9.用自動酶標儀將A405和A655間的差值作為結果記錄。
     

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