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    ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)誤差注意事項(xiàng)

    發(fā)布時(shí)間: 2014-04-28  點(diǎn)擊次數(shù): 872次

    ELISA試劑盒可以簡(jiǎn)單、地從瓊脂糖凝膠上純化回收DNA段,同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無(wú)機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。可回收100bp–40 kb DNA段,可純化高達(dá)10μg的DNA段,回收率可達(dá)80%以上(<100bp或>10kb的DNA段回收率為30–50%)。使用ELISA試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、文庫(kù)篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
    ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
    1、 不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
    2、 若不同批號(hào)試劑的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
    3、 加樣時(shí)樣品量誤差,對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響很大,建議校對(duì)加樣器。
    4、 反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),*孔和zui后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
    5、 由于滴瓶的精密性肯定不如加樣器,不排除不同滴頭滴量的誤差。另外滴加過(guò)程中是否產(chǎn)生氣泡、速度是否均勻,是否顫動(dòng)等影響液量的因素均可導(dǎo)致以上情況。高標(biāo)準(zhǔn)要求時(shí)應(yīng)使用加樣器。
    6、 閾值附近實(shí)際上是個(gè)灰區(qū)(gray scale),不能截然分為陰性、陽(yáng)性,國(guó)外廠家均要求對(duì)這部分可疑標(biāo)本進(jìn)行奇數(shù)次復(fù)檢,以次數(shù)多者為準(zhǔn),如一次陽(yáng)兩次陰zui后判為陰,但實(shí)際上是否為陰不好說(shuō),只有判為可疑,臨床上可以讓患者過(guò)一段時(shí)間后再測(cè)。
    7、 肉眼觀察稍顯色,酶標(biāo)儀打印為陰性的標(biāo)本在實(shí)際工作中是難以避免的,肉眼目測(cè)結(jié)果不可靠,應(yīng)以酶標(biāo)儀判讀為準(zhǔn)。
    8、 由陰性變?yōu)閺?qiáng)陽(yáng)性原因多為操作過(guò)程中漏加試劑等有關(guān)。
    9、 臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正常現(xiàn)象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。

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