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    ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌?

    發(fā)布時間: 2014-05-18  點擊次數(shù): 1039次

    elisa試驗中洗滌是一個*的部分,因為洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比,每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在zui后一步產(chǎn)生信號。用戶可以通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來不理想的結(jié)果。所以說洗滌是ELISA試劑盒實驗中*的部分,操作人員應(yīng)該重視起來,不可馬虎大意。
    ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌?
    ELISA試劑盒實驗中該如何洗滌?
    (1)浸泡式
    a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
    b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
    c.浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1~2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
    d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
    e.重復(fù)操作c和d,洗滌3~4次(或按說明規(guī)定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。
    微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質(zhì)的疏水基團借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,并借助于親水基團和水分子的結(jié)合作用,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,其濃度可在0.05%~0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
    (2)流水沖洗式
    流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗滌時附接一特殊裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,其洗滌效果更為*,且也簡便、快速。已有實驗表明,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,洗滌效果更佳。

    ELISA試劑盒實驗中洗滌后為什么要靜置?
    洗滌只是洗掉反應(yīng)中的非特異性吸附,可采用靜置或者振蕩的方式,靜置是讓洗滌液充分洗掉未結(jié)合的酶標(biāo)物或其他的物質(zhì).

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