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    ELISA試劑盒實驗人員培訓

    發布時間: 2014-06-13  點擊次數: 1014次

        在ELISA試劑盒實驗中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

        固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

        包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

        酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

        酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

        目前,國內也有很多酶聯免疫(ELISA)代測服務機構。

    ELISA試劑盒檢驗人員需經過培訓,熟練掌握本專業如下幾方面的技術知識:
    ◎檢驗項目的基本原理 ELISA試劑盒(ELISA試劑盒原理);
    ◎臨床意義;
    ◎熟悉檢測技巧,了解易出差錯的環節及難點;
    ◎熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成,包被片段及其組成);
    ◎ 熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數據處理的能力和質量控制知識。
    ◎某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經有關部門組織的專門培訓班,考試合格后持證上崗。

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